五、消化液的采集
(一) 唾液
1、直接抽取法
在急性實(shí)驗(yàn)中,可用吸管直接插入動(dòng)物口腔或唾液腺導(dǎo)管抽吸唾液,此法非常簡(jiǎn)單,但從口腔抽吸唾液會(huì)有雜質(zhì)混入。
2、制造腮腺瘺法
在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集狗的唾液,要用外科手術(shù)方法將腮腺導(dǎo)管開(kāi)口移向體外,即以腮腺導(dǎo)管為中心,切成一直徑約2~3cm的圓形粘膜片,將此粘膜片,與 周?chē)M織分開(kāi),穿過(guò)皮膚切口引到頰外,將帶有導(dǎo)管開(kāi)口的粘膜片與周?chē)钠つw縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到較純凈的唾液。
(二)胃液
1、直接收集胃液法
急性實(shí)驗(yàn)時(shí),先將動(dòng)物麻醉,將插胃管經(jīng)口插入胃內(nèi),在灌胃管的出口連一注射器,用此注射器可收集到胃液,此法適用于狗等大型動(dòng)物。如是大鼠,需手術(shù) 剖腹,從幽門(mén)端向胃內(nèi)插入一塑料管,再由口腔經(jīng)食道將一塑料管插入前胃,用pH7.5、35℃左右的生理鹽水,以12ml/h的流速灌胃,收集流出液,進(jìn) 行分析。
2、制備胃瘺法
在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動(dòng)物的胃分離出一小部分,縫合起來(lái)形成小胃,主胃與小胃互不相通,主胃進(jìn)行正常消化,從小胃可收集到純凈的胃液。應(yīng)用該法,可以待動(dòng)物恢復(fù)健康后,在動(dòng)物清醒狀態(tài)下反復(fù)采集胃液。
(三)胰液和膽汁
在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,主要是通過(guò)對(duì)胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開(kāi)口于十二指腸降部,在緊靠腸壁處切開(kāi)胰管,結(jié)扎固定并與導(dǎo)管相連, 即可見(jiàn)無(wú)色的胰液流入導(dǎo)管。大鼠的胰管與膽管匯集于一個(gè)總管,在其入腸處插管固定,并在近肝門(mén)處結(jié)扎和另行插管,可分別收集到胰液和膽汁。有時(shí)也可通過(guò)制 備胰瘺和膽囊瘺來(lái)獲得胰液和膽汁。
六、腦脊液的采集
(一)狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法
穿刺部位在兩髂連線(xiàn)中點(diǎn)稍下方第七腰椎間隙。動(dòng)物輕度麻醉后,側(cè)臥位固定,使頭部及尾部向腰部盡量彎曲,剪去第七腰椎周?chē)谋幻O竞蟛僮髡咴趧?dòng) 物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮膚,右手持腰穿刺針垂直刺入,當(dāng)有落空感及動(dòng)物的后肢跳動(dòng)時(shí),表明針已達(dá)椎管內(nèi)(蛛網(wǎng)膜下腔),抽去針芯,即見(jiàn)腦脊 液流出。如果無(wú)腦脊液流出,可能是沒(méi)有刺破蛛網(wǎng)膜。輕輕調(diào)節(jié)進(jìn)針?lè)较蚣敖嵌龋绻X脊液流的太快,插入針芯稍加阻塞,以免導(dǎo)致顱內(nèi)壓突然下降而形成腦疝。
(二)大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法
在大鼠麻醉后,頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒,用手術(shù)刀沿縱軸切一縱行切口(約2cm)用剪刀鈍性分離頸部背側(cè)肌肉。為避免出血,最深層附 著在骨上的肌肉用手術(shù)刀背刮開(kāi),暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進(jìn)針直接抽取腦脊液。抽取完畢逢好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉,防止感染。采完腦脊 液后,應(yīng)注入等量的消毒生理鹽水,以保持原來(lái)腦脊髓腔的壓力。
七、骨髓的采集
1、大鼠、小鼠骨髓的采集
用頸椎脫臼法處死動(dòng)物,剝離出胸骨或股骨,用注射器吸取少量的Hank平衡鹽溶液,沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。如果是取少量的骨髓作檢查,可將胸骨或股骨剪斷,將其斷面的骨髓擠在有稀釋液的玻片上,混勻后涂片涼干即可染色檢查。
2、大動(dòng)物骨髓的采集
狗等大動(dòng)物骨髓的采集可采取活體穿刺方法。先將動(dòng)物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚,然后估計(jì)好皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長(zhǎng)度固定好。操作 人員用左手把穿刺點(diǎn)周?chē)钠つw繃緊,右手將穿刺針在穿刺點(diǎn)垂直刺入,穿入固定后,輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入,當(dāng)穿刺針進(jìn)入骨髓腔時(shí)常有落空感。狗骨髓的采 集,一般采用髂骨穿刺。狗等大動(dòng)物常用的骨髓穿刺點(diǎn):胸骨:穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各點(diǎn)的中點(diǎn)。脛骨:穿刺部位是 股骨內(nèi)側(cè)、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺結(jié)束后要用膠布封貼穿刺孔,防止發(fā)生氣胸。