1常用器械及使用方法
常用的器械有解剖刀、外科手術剪、腦刀、骨剪、鑷子、骨鋸、探針、拉鉤、載玻片、放大鏡、注射器等。
1.解剖刀 主要用于切開和分割軟組織,刀片宜用血管鉗(持針鉗也可)夾持安裝,避免割傷手指。常用的持刀法有以下4種:執弓式、抓持式、執筆式、反挑式。
2.手術剪用于分離與剪開。
3.血管鉗 用于分離和鉗夾組織,鉗夾縫合針和布巾等。
4.手術鑷 用于夾持組織,以利于解剖和縫合。
5.拉鉤 用于牽引和暴露。
2病理取材的基本要求
從大體標本上按照病理檢查的目的和要求切取適當大小的組織塊,供制片進行顯微鏡檢查。為達到診斷的目的,取得合適的組織是關鍵。這不僅要求材料要盡可能新鮮,而且要有一定的數量和良好的質量。
1.活檢組織標本在手術切下后應立即放入10%福爾馬林固定(電子顯微鏡標本則用適當的固定液固定)。尸檢標本應爭取在死亡后盡可能短的時間內取材。
2.通常選擇正常與病變交界處組織,即包括病變本身及病變周圍組織。
3.對照組動物相同器官取材時,選材部位應盡量一致。
4.肉眼看不到明顯的病變時,各試驗組選取標本位置應一致。
5.所選組織應包括臟器全部層次結構或重要結構,如腎應包括皮質、髓質和腎盂。
6.體積大和分葉的器官,應視不同組織選取多個部位,小器官可整體取材并固定,如淋巴結、扁桃體、甲狀腺等。
7.胃腸標本應將內容物沖洗掉,以免內容物影響組織固定,產生自溶。
8.所取材料應盡量保持肉眼標本的完整性,不宜過厚或過薄,一般厚約3~5mm,大小為1.5~2cm2。
9.切取組織時不要擠壓,應使用鋒利刀具,少用剪刀,勿選用被器械鉗壓過的部位。
10.標本取材要熟練,盡可能快地完成整個過程,特別是易自溶的組織,如腸道、腦、腺體等。
11.第一次取材組織不能作出確診時,須再次甚至多次取材。每次取材均應將送檢單加以記錄。
12.組織取材完畢,標本應按序存放,并加足固定液以備復查之用。通常保留1個月后,再清理銷毀。
3病理取材的基本操作
1.切開 在同一平面上時,先繃緊組織,將刀刃與平面垂直,用力要得當,一次垂直切開,切口整齊而不偏斜,禁止斜切和鋸切,以減少損傷。切開多層組織時,一般應按組織層次分層切開,避免損傷深層組織器官。
2.組織分離法 可用銳性分離法,使用刀、剪等銳性器械直接切割,如皮膚、黏膜、精細結構和緊密連接組織的分離;也可用鈍性分離法,使用分柄、止血鉗、剝離器、手指等分離,如肌肉、疏松結締組織等的分離。
3.結扎 用絲線打結的方法結扎組織和血管,用于縫合器官和皮膚。
4.止血 大量出血導致胸、腹部積血使剖檢視野模糊不清,可能會影響和干擾病變的辨別和取材,因此動物剖檢有時要進行止血,常用方法有紗布塊壓迫止血法、鉗夾止血法、結扎止血法。
4取材程序
剖檢順序多為先腹腔后胸腔,再腦、脊髓、骨髓、皮膚肌肉等。取材順序基本與此相同。
1.腹腔和腹腔器官 沿腹部正中線切開劍突至肛門之間的腹前壁,再沿最低位肋骨分別向左右兩側切開側腹壁至脊柱兩旁,完全暴露腹腔器官。觀察有無積液、血液和炎性滲出物,如有則用吸管吸出,測量容積并經離心沉淀涂片檢查,必要時作細菌培養。檢查黏膜是否光滑,有無充血、淤血、出血、破裂、膿腫、粘連、腫瘤、寄生蟲等,檢查膈的緊張度及有無破裂。
(1)脾:檢查大小、厚薄、硬度、性狀、色澤,是否肥厚、破裂等。然后沿長軸將脾切成兩半,切面要平整,檢查脾小梁、紅髓、濾泡的色澤、切面的出血量。
(2)胰腺:檢查胰腺色澤和硬度,切面檢查有無出血。
(3)胃腸:檢查胃的大小、胃腸道漿膜面的色澤,有無粘連、腫瘤、寄生蟲結節。然后沿胃大彎、腸系膜附著部依次剪開胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸。觀察胃內有無異物,內容物的氣味及性狀,除去內容物,檢查黏膜顏色,有無充血、出血、化膿。采用邊剪開邊觀察的辦法檢查腸管,觀察腸內容物數量、性狀,有無氣體、血液、異物、寄生蟲,腸黏膜皺襞有無增厚、水腫、充血、黏液量、潰瘍、壞死、淋巴組織性狀及有無炎癥。
(4)腎:首先檢查腎的大小、硬度,被膜是否容易剝離,腎表面的色澤、平滑度,有無瘢痕、出血變化。然后檢查切面皮質和髓質的色澤,有無淤血、出血、化膿和梗死。注意觀察皮質和髓質交界處的切面是否隆凸,以及腎盂、輸尿管、腎淋巴結的性狀,有無腫瘤及寄生蟲等。
(5)肝:首先檢查肝的大小、被膜的性狀、邊緣的厚薄、實質的硬度和色澤,以及肝淋巴結、血管、肝管等的性狀。然后作切面,檢查切面的出血量、色澤,肝小葉性狀、有無膿腫、肝壞死等變化。
(6)腎上腺:觀察外形、大小、色澤和硬度,作縱切和橫切,檢查皮質和髓質的色澤及有無出血。
2.盆腔器官
(1)膀胱:檢查膀胱的大小、尿量及色澤,黏膜有無出血、炎癥和結石等。
(2)雄性生殖器官:檢查睪丸、附睪、凝固腺、前列腺有無粘連、出血、水腫、積液等。
(3)雌性生殖器官:沿子宮體背側剪開子宮角,檢查子宮內膜的色澤、有無充血、出血、炎癥等,觀察卵巢和輸卵管有無粘連、出血、水腫、積液等。
3.胸腔、口腔及其器官用鑷子夾住胸骨劍突,剪斷膈肌與胸骨的連接,提起胸骨,在胸椎兩側分別剪斷左、右側胸壁的肋骨,取下整個胸壁,打開胸腔,依次取出胸腺和心臟。將下頜骨的兩下頜支內側與舌連接的肌肉切斷,將咽、喉、氣管、食管與周圍組織分離,用鑷子夾住氣管向上提起,剪斷肺與胸膜的連接韌帶,然后將咽、喉、氣管、食管連同整個肺一并取出。如有積液應觀察其數量和性狀,盡量吸取,測量容積并涂片,檢查胸膜色澤,有無出血、充血或粘連。
(1)心臟:剪開心包膜,暴露心臟,注意心包的光澤度及心包內液體的情況,心臟的大小、外形、心外膜情況。自下腔靜脈入口處至右心房作直線剖開,從此直線中點沿心臟右緣剖至心尖部,從距離心尖部與心室間隔右側1cm處平行地剖至肺動脈;檢查右心房、右心室、三尖瓣、肺動脈瓣、腱索有否病變。自左、右靜脈入口處將左心房直線切開,沿心臟左緣剖至心尖部,再從距離心尖部與心室間隔左側1cm處平行地剖開左心室的前壁和主動脈,檢查二尖瓣、主動脈瓣、腱索有無病變,左心房、左心室內壁有無出血和感染。自冠狀動脈口起剪開前降支和旋支,在主動脈根部右側,于右心室的心外膜找到右冠狀動脈主干,先橫切一刀,再剪至后降支;觀察有無粥樣硬化和血栓等。
(2)口腔:檢查牙齒的變化,口腔黏膜的色澤,有無外傷、潰瘍和白斑,舌黏膜有無出血、外傷及舌苔的情況。
(3)咽喉:觀察喉頭、會厭軟骨黏膜的色澤、淋巴結的性狀及喉囊有無積膿。
(4)鼻腔:檢查鼻腔和鼻中隔黏膜的色澤,有無出血、炎性水腫、結節、糜爛、潰瘍穿孔及瘢痕等。
(5)下頜及頸部淋巴結:檢查下頜及頸部淋巴結的大小、硬度、有無出血和化膿等。
(6)氣管:檢查氣管有無出血、黏液量等。
(7)肺:檢查肺的色澤,有無出血、炎癥、肺氣腫、肺萎縮、腫瘤等。
(8)其他器官:檢查胸腺、甲狀腺、扁桃體等的色澤,有無粘連、一出血、水腫等。
4.顱腔及腦 以猴為例,剝離顱頂部軟組織,沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm處的連線,用弓形鋸環繞該線鋸開顱骨外板及板障,然后用丁字鑿輕輕鑿開內板,揭開顱蓋,此時可見覆蓋于腦表面的硬腦膜,切開硬腦膜暴露腦組織,在距顱骨鋸口斷端上0.5cm處,從前向后環行剪開硬腦膜,枕部的硬腦膜應保留1.5cm長,防止取腦過程向后推壓腦組織時,枕骨斷端損壞枕葉腦組織。向后方輕輕揭起硬腦膜及大腦鐮,暴露腦組織,用手指從額骨前上方伸入顱前窩,輕輕推壓大腦額葉,直至見到篩板上的嗅球為止,切斷嗅絲與嗅球的聯系,將嗅球與腦一齊拉起,見到視神經和視交叉時立刻停止,在腦底附近依次切斷頸內動脈、視神經,再將腦向后拉,可見到垂體及漏斗,繼續將腦向后拉起,切斷連于腦的腦神經。從腦干腹側面把手術刀伸入枕骨大孔,切斷脊髓,即可將腦取出,用流水沖洗干凈備用。新鮮腦很軟,易變形和受挫傷,操作過程中必須用手扶托,取出腦后應立刻用紗布包裹,浸泡固定液中保存,以免變形。
檢查軟腦膜、硬腦膜血管充盈情況,腦回之間的腦溝中液體的數量與色澤,腦表面凸起或凹下的地方是否明顯,可用手觸摸判定其硬度。用刀將腦做一水平切面,保留胼胝體,暴露側腦室,注意檢查尾狀核有無出血、軟化灶,側腦室內容物數量、性質,然后將腦做多處切面,檢查有無變化。
5不同組織的取材方法
對犬進行尸檢取材時,各器官組織的取材部位和組織塊數大致如下:
1.心和大血管:左、右心室,室間隔各1塊,包括由外膜到內膜各層肌組織。左、右心耳各一塊。主動脈1塊。
2.氣管、肺:氣管1塊。肺3~5塊,取自不同的葉。
3.肝、膽囊:肝2~3塊,切成正方形和長方形。膽囊1塊。
4.脾:1~2塊。
5.胰:1塊。
6.腎:右腎1塊,切成正方形,左腎1塊,切成長方形,都包括皮質、髓質和腎盂。
7.膀胱:1塊。
8.腎上腺:左、右各取1塊。
9.消化道:食管、胃、十二指腸、小腸、大腸各取1塊。
10.骨:胸骨1塊。
11.胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、唾液腺:各1塊。
12.子宮:宮頸1塊,宮體1~2塊。
13.睪丸、附睪或卵巢:1塊。
14.大腦、小腦、腦干:各1塊。
15.垂體:1塊,前葉或包括前、后葉。
16.視神經:1塊。
17.頸髓、胸髓、腰髓、坐骨神經:各1塊。
18.乳腺或前列腺:1塊。
19.注射部位皮膚:1塊。
20.頸部淋巴結:2~3個。
注意如某些臟器有嚴重病變,或有特殊情況,應增加取材組織塊數,以便徹底檢查明確診斷。
對小鼠、大鼠進行尸檢取材時,各器官組織的取材部位和組織塊數大致如下:
1.心和大血管:心臟1塊,其中包括左、右心室,左、右心耳,室間隔。主動脈1塊。
2.氣管、肺:氣管1塊。肺3~5塊,取自不同的葉。
3.肝、膽囊:肝2塊,切成正方形和長方形。膽囊1塊。
4.脾:1~2塊,取最寬處。
5.胰:1塊。
6.腎:右腎1塊,切成正方形,左腎1塊,切成長方形,都包括皮質、髓質和腎盂。
7.膀胱:1塊。
8.腎上腺:左、右各取1塊。
9.消化道:食管、胃、空腸、回腸、結腸有淋巴結處和直腸各取1塊。
10.骨:胸骨1塊。
11.胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、唾液腺:各1塊。
12.子宮:宮頸1塊,宮體1~2塊。
13.睪丸、附睪或卵巢:1塊。
14.大腦、小腦、腦干:各1塊。
15.垂體:1塊,前葉或包括前、后葉。
16.視神經:1塊。
17.頸髓、胸髓、腰髓、坐骨神經:各1塊。
18.乳腺或前列腺:1塊。
19.注射部位皮膚:1塊。
20.頸部淋巴結和腸系膜淋巴結:2~3個。
6活檢組織取材
除以上各點外(見前述),還應注意取材后立即用液氮速凍,而且制作冰凍切片的同一塊組織一份標本要做常規石蠟切片,用于 HE染色和特殊染色等,有的還要進行免疫組織化學染色甚至電子顯微鏡觀察,因此其組織取材要迅速完成。盡量保持組織結構完整。
細胞標本取材和制片方法一般有印片法、穿刺法、沉淀法和活細胞標本的制備等。
1.印片法常用于活檢和手術標本,新鮮標本沿病灶中心剖開,將病灶區輕壓于載片上,吹干后立即將其浸入固定液內5~10min,取出自然干燥,低溫儲存。
2.穿刺法常用于淋巴結、軟組織、肝、腎和肺等,穿刺液少,可直接涂在載片上,細胞盡量涂均勻。穿刺液多,細胞豐富,可滴入裝有1~2ml Hanks液試管內,輕輕攪拌,以500轉/分低速離心5~10min,棄上清,將沉淀制成細胞懸液(2×100000/ml)。吸一滴涂于載片上,鏡檢以細胞較密不重疊為好。干燥后即可固定。
3.沉淀法主要用于胸水、腹水、尿液和腦脊液等體液多而細胞少的標本。常規細胞標本制備:細胞多時,可直接吸取少量液體直接涂片,細胞少時,可吸取底部自然沉淀液5ml,以1500轉/分離心10min,再涂片。
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