應用MTT、CCK-8比色法,檢測細胞存活和生長。MTT檢測原理為活細胞內線粒體中的琥珀酸脫氫酶能催化外源無色的MTT形成藍色的結晶Formazan,并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的Formazan,用酶聯免疫檢測儀在一定波長處測定其吸光值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。CCK-8原理與MTT類似,其靈敏度更高,而且孵育后可以直接上機檢測,不需要DMSO溶解,操作更方便。
1.細胞接種:收到客戶細胞后,我們會用細胞計數板對細胞進行計數,得出細胞懸液濃度。計算出應稀釋的倍數,按MTT或CCK-8試劑盒要求在96孔板內接種相應濃度的細胞懸液;
2.細胞培養:然后在無菌恒溫細胞培養箱內培養接種好的96孔細胞培養板,并實時觀察細胞狀態;
3.藥物處理并呈色:按不同濃度梯度加入藥物作用細胞;
4.溶解、比色:加入MTT或CCK-8,按操作要求孵育相應時間,在酶標儀內檢測對照組和實驗組的吸光值。并處理數據得出比色結果。(CCK-8孵育后可直接比色,MTT需要加DMSO溶解紫色晶體)